江苏快三开奖结果走势图一定牛

  • <tr id='7bNquY'><strong id='7bNquY'></strong><small id='7bNquY'></small><button id='7bNquY'></button><li id='7bNquY'><noscript id='7bNquY'><big id='7bNquY'></big><dt id='7bNquY'></dt></noscript></li></tr><ol id='7bNquY'><option id='7bNquY'><table id='7bNquY'><blockquote id='7bNquY'><tbody id='7bNquY'></tbody></blockquote></table></option></ol><u id='7bNquY'></u><kbd id='7bNquY'><kbd id='7bNquY'></kbd></kbd>

    <code id='7bNquY'><strong id='7bNquY'></strong></code>

    <fieldset id='7bNquY'></fieldset>
          <span id='7bNquY'></span>

              <ins id='7bNquY'></ins>
              <acronym id='7bNquY'><em id='7bNquY'></em><td id='7bNquY'><div id='7bNquY'></div></td></acronym><address id='7bNquY'><big id='7bNquY'><big id='7bNquY'></big><legend id='7bNquY'></legend></big></address>

              <i id='7bNquY'><div id='7bNquY'><ins id='7bNquY'></ins></div></i>
              <i id='7bNquY'></i>
            1. <dl id='7bNquY'></dl>
              1. <blockquote id='7bNquY'><q id='7bNquY'><noscript id='7bNquY'></noscript><dt id='7bNquY'></dt></q></blockquote><noframes id='7bNquY'><i id='7bNquY'></i>
                國內首篇!安諾 Sequel II測序成果在線發表於Cell Research
                2019.10.18

                2019年10月7日,來自同濟大學生命科學與技術學院的楊鵬、高紹榮和王譯萱研究團隊於Cell Research(IF=17.848)上在線發表題為Precise temporal regulation of Dux is important for embryo development的文章,揭示了Dux的精準調控是早期胚胎發育的關鍵但非必要條件,並利用三代Sequel II測序證實了Dux-KO小鼠中的大片段缺失。這也是國內首篇使用Sequel II測序數據發表的文章安諾基因在本次研究中承擔了三代重測序的工作。


                a1.png


                樣本選擇

                Dux-KO小鼠的肝臟和肌肉組織


                測序策略

                PacBio Sequel II測序,構建30 kb CLR文庫


                實驗設計


                a2.jpeg


                主要結果

                1. 合子基因激活(ZGA)是通過母本向合子轉換這一過程實現的,該過程中母本的RNA和蛋白質發生降解,合子基因被轉錄激活。近期有研究發現Dux是調控ZGA過程的主要誘導因子,它與ZGA轉錄本結合並快速將其激活,觸發胚胎細胞的發育進程。為驗證Dux在ZGA及胚胎發育中的重要作用,研究人員利用CRISPR/Cas9技術構建了Dux-KO小鼠模型。將Cas9核酸酶mRNA和兩個針對Dux的sgRNA註入受精卵並轉移到假孕受體中,之後獲得基因經過編輯的F0代。令F0與具有相同遺傳背景的野生型(WT)進行回交,獲得F1後再次與WT回交,從而獲得具有相同突變的雜合Dux+/-(Dux-Het)小鼠,純合Dux-KO小鼠通過雜合小鼠間的自交產生。


                a3.jpeg

                Dux-KO和WT小鼠的Dux基因簇分布


                2.利用三代重測序技術對Dux-KO小鼠的基因型進行進一步確認,發現了LOC100504180(Duxf1Dux(Duxf3Gm4981(Duxf4的大片段缺失,以及Gm10807(Duxf2Gm9919(Duxf5的短片段缺失,體現了PacBio長讀長測序檢測大片段結構變異方面的優勢。

                Dux-KO小鼠可以存活到成年,但其頻率與孟德爾分布略有偏離(下圖左)。Dux-KO小鼠交配所產生的後代相比WT或Dux-Het的後代更少。因此,Dux缺失雖然不致死,但會導致產仔數量的顯著減少,表明Dux是早期胚胎發育的關鍵但非必要因素。


                a4.jpeg

                Dux缺失導致產仔數量的顯著減少


                3. 為進一步驗證Dux缺失在胚胎中的影響,研究人員采集了Dux-KO和WT個體在多個時期的胚胎,包含受精卵和早中晚期的2C(二細胞)胚胎,進行單細胞轉錄組(Smart-seq2)分析。Dux僅在早期2C階段短暫表達,通過對比Dux-KO和WT胚胎在2C階段各個時期ZGA相關基因的表達,發現在Dux缺失的條件下ZGA過程仍然可以被激活,但發生的時機被推遲(下圖d-e)。


                a5.jpeg

                WT與Dux-KO胚胎在2C階段基因表達情況比較


                MERVL通常在受精卵階段就能被檢測到,早於Dux的表達,它可以與一些2C基因生成嵌合轉錄本,促進附近的2C基因表達。在Dux-KO胚胎中發現MERVL在2C階段的中晚期顯著上調(上圖f),這與ZGA關聯基因的激活顯著相關,表明Dux是通過增強而不是直接激活來調控ZGA轉錄本的表達。

                4.  在胚胎的2C晚期階段通常已經檢測不到Dux的表達,研究人員為深入探究Dux在早期胚胎發育中的功能,將Dux-EGFP(Dux-OE組)與對照組EGFP的mRNA註射到2C期胚胎的卵裂球中,利用免疫染色法觀察胚胎的發育進程。對照組的表達一直持續到囊胚階段,而Dux-EGFP的表達在8 h後劇烈減弱,且胚胎發育停止在4C階段。這些結果表明Dux在胚胎中的延長表達會導致早期胚胎的發育受阻。


                a6.jpeg

                Dux在胚胎中的延長表達導致早期胚胎的發育受阻


                5. 無論內源還是外源的Dux表達均在胚胎中僅持續了數個小時,尤其當Dux mRNA被註射到受精卵中後,Dux-EGFP在3-5h內劇烈降解,且對胚胎發育未產生影響(下圖a-c)。這也進一步表明了Dux的降解對胚胎發育的重要影響。蛋白酶抑制劑MG132的使用大大延遲了受精卵中Dux-EGFP信號的衰減,使得發育受阻(下圖d)。此外,Dux-EGFP在NIH3T3細胞系中的過表達也揭示了Dux不僅與ZGA相關蛋白相互作用,也和泛素途徑相關蛋白發生相互作用(下圖e)。


                a7.jpeg

                外源Dux-EGFP在受精卵中劇烈降解


                綜上,本項研究表明了Dux通過增強而不是直接激活ZGA來調控早期胚胎的發育過程。盡管Dux敲除小鼠可以存活至成年,但Dux的缺失會推遲ZGA過程並降低胚胎發育的潛能。此外,Dux在2C階段早期短暫表達後,會在DNA水平被沈默並在RNA與蛋白水平被降解,長期激活會嚴重損害早期胚胎的發育。

                PacBio長讀長測序在檢測結構變異(SV)方面具有無可比擬的優勢,彌補了此前基於二代測序只能集中於分析SNP、InDel等小片段變異的不足,能夠更精準地識別大於50 bp染色體插入、缺失、倒位、易位等即使是重復區域也能輕松跨越,從而簡化分析,使檢測分析更準確高效。


                自2017年推出三代測序服務以來,北京快3先後引進了10臺PacBio Sequel和4臺Sequel II測序儀,產品服務類型涵蓋三代基因組組裝、人重測序、動植物重測序、全長轉錄組測序等,累計完成三代項目超800+。2019年7月,北京快3測序實驗室又榮獲PacBio官方認證測序服務商證書。北京快3將秉承客戶至上的服務理念為合作夥伴提供更快速、更優質的三代測序服務。


                參考文獻

                Guo Mingyue., Zhang Yanping., Zhou Jianfeng., Bi Yan., Xu Junqin., Xu Ce., Kou Xiaochen., Zhao Yanhong., Li Yanhe., Tu Zhifen., Liu Kuisheng., Lin Jiaming., Yang Peng., Gao Shaorong., Wang Yixuan., (2019). Precise temporal regulation of Dux is important for embryo development[J], Cell Res., undefined, undefined.


                分享:
                Copyright ? 北京快3基因科技(北京)有限公司 京ICP備12029022號-1